E.coli具有遺傳背景清晰、細(xì)胞增殖快、成本低、表達(dá)量高、穩(wěn)定性好和抗污染能力強(qiáng)等特點(diǎn)，適用于多種蛋白的表達(dá)。大腸桿菌蛋白表達(dá)系統(tǒng)是目前應(yīng)用較為廣泛，也是比較經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的蛋白表達(dá)系統(tǒng)。缺點(diǎn)是該表達(dá)系統(tǒng)易形成包涵體，含有內(nèi)毒素，沒有翻譯后修飾的加工功能。該系統(tǒng)適用于表達(dá)原核來源的蛋白或不需要翻譯后修飾的真核來源蛋白，特別是小分子蛋白。
藍(lán)景科信擁有豐富的E.coli蛋白表達(dá)純化經(jīng)驗(yàn)，熟練運(yùn)用多種表達(dá)宿主菌，提供多種表達(dá)載體和標(biāo)簽的選擇，為您提供優(yōu)質(zhì)的原核蛋白表達(dá)服務(wù)。
原核蛋白表達(dá)是指在原核細(xì)胞中表達(dá)蛋白質(zhì)，通常使用大腸桿菌或酵母細(xì)胞作為宿主細(xì)胞。原核蛋白表達(dá)具有快速、簡便、大規(guī)模產(chǎn)生目的蛋白質(zhì)的優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于生物技術(shù)研究、藥物開發(fā)、工業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域。
原理：
原核蛋白表達(dá)的基本原理是將外源基因克隆到表達(dá)載體中，通過將重組載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞中使之表達(dá)目的蛋白。基于表達(dá)載體的選擇不同，有多種表達(dá)策略可供選擇，例如強(qiáng)化啟動(dòng)子、可誘導(dǎo)的表達(dá)系統(tǒng)、標(biāo)簽蛋白標(biāo)記等。此外，可以通過優(yōu)化培養(yǎng)條件、細(xì)胞密度及時(shí)間等方法來提高蛋白產(chǎn)量。
原核蛋白表達(dá)的操作方法：
1.選擇適合的表達(dá)載體：合適的表達(dá)載體包括表達(dá)啟動(dòng)子、編碼區(qū)、終止信號(hào)和選擇標(biāo)記等。常用的載體有pET、pGEX、pMAL、pETDuet等。選擇適合的載體要考慮到表達(dá)效率、純度和易于操作等因素。
2.將目的基因克隆到載體中：將目的基因與載體酶切、連接，形成重組載體。連接需要注意將基因位于正確位置，使用合適的連接方式。
3.轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞：將重組載體導(dǎo)入宿主菌株E.coli中，可采用熱激法、化學(xué)法、電滲法等方式。需要注意重組過程的無菌操作和選擇正確的培養(yǎng)條件。
4.優(yōu)化培養(yǎng)條件：通過調(diào)整適宜的溫度、菌種、基本培養(yǎng)液的選擇等因素，提高目的蛋白的表達(dá)率。
5.蛋白質(zhì)提取：通過離心、超聲波裂解、化學(xué)方法等方式用不同的載體將表達(dá)蛋白提取出來。
6.純化：對(duì)提取出來的蛋白質(zhì)進(jìn)行純化，常用的有離子交換、凝膠過濾、親和層析、逆流層析等方法。選擇純化方式需要考慮成本、產(chǎn)量和純度等因素。
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