細(xì)胞培養(yǎng)耗材
一、玻璃器材
培養(yǎng)皿、滴流瓶、刻度吸管、離心管、培養(yǎng)瓶、燒杯、量筒、三角燒瓶
二、塑料器材
多孔培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶
三、橡皮器材
橡皮制品（最，好是硅制品）做各種瓶或試管的塞子、蓋子。
四、金屬器材
剪刀、鑷子、手術(shù)刀、解剖刀、血管鉗、組織鑷、眼科鑷及各種型號針頭
五、其他物品
紗布、注射器和針頭
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一、復(fù)蘇
1.把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動（注意防止蓋子不緊致使液體進(jìn)入凍存管）。液體都融化后(大概1-1.5分鐘)，拿出來噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺里。
2.把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來)，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
3.把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動，使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。
4.標(biāo)好細(xì)胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到37℃的5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。
5.根據(jù)細(xì)胞增長速度2-3天換一次培養(yǎng)基。
二、傳代
1.培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時(shí)要傳代。
2.把原有培養(yǎng)基吸掉。
3.加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌?能覆蓋細(xì)胞就行)，消化1-2分鐘。
4.細(xì)胞都變圓后加入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
5.用移液槍吹打細(xì)胞，讓細(xì)胞懸浮起來。
6.把細(xì)胞吸到10ml或15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
7.倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細(xì)胞都吹起來。
8.根據(jù)細(xì)胞種類把細(xì)胞傳到幾個(gè)培養(yǎng)皿中。一般，癌細(xì)胞分5個(gè)，正常細(xì)胞傳3個(gè)。繼續(xù)培養(yǎng)。
三、凍存
把細(xì)胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細(xì)胞種類，凍存日期。4℃30min，-20℃30min，-80℃過夜，然后放到液氮灌中保存。
凍存液的配制：70%的完全培養(yǎng)基+20
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